一、 组织标本的准备
组织标本经甲醛固定24-48h，常规脱水、透明、浸蜡和包埋；4μm石蜡切片，贴在涂有apes胶的干净载玻片上。58℃烤8-24h。ish试剂的配制（所有试剂和用具均用depc水处理）。
二、操作流程：
一、杂交片的前处理
1、常规脱蜡至水。
2、0.01mol/l,ph8.0 edta(用0.02 mol/l,ph8.0tb配制) 98℃ 煮 15min;
3、自然冷却 15min,蒸馏水洗2-5min;
4、2μg/ml蛋白酶k(用te配制) 室温 4min, 0.1mol/l甘氨酸pbs洗10min.；
5、蒸馏水洗2-5min;
6、75%,85%,95%,100%酒精系列脱水各1min；
二、杂交
将荧光标记探针加入48ul无rnaas pbs溶解，用杂交液（4×ssc,25%去离子甲酰胺, 无rnaas pbs）1:200稀释,20ul杂交液并覆盖，55℃杂交90min, 37℃杂交：24h，
三、杂交后洗涤（洗涤过程应避光）
(1)将切片浸入杂交后洗涤缓冲液的洗缸中72℃ 30min（洗缸应提前30min放入72℃水浴锅内预热到72℃，2×10min。
★杂交后洗涤缓冲液：2×ssc/0.3% np-40
20×ssc ph5.3 100ml
蒸馏水 847ml
np40 3ml
最后体积 1000ml
用1n naoh调ph7.0-7.5。
(2)2×ssc.0.3% np-4073℃洗3min。
⑶0.4×ssc.0.3% np-4073℃洗3min
⑷70%乙醇洗 1min
(3)每片滴加10μl dap1(4,6 diamidino-2-phenylinodole)封片衬染5min。
(4)不及时观察，可将切片保存在-20℃冰箱暗处，观察时复温至室温即可。