免疫荧光
免疫荧光实验流程
一.脱蜡至水
1. 二甲苯ⅰ(8min)
2. 二甲苯ⅱ(8min)
3. 无水乙醇和二甲苯1:1(5min)
4. 无水乙醇(3min)
5. 95%乙醇(3min)
6. 85%乙醇(3min)
7. 75%乙醇(3min)
8. pbs洗3遍
二．抗原修复
edta抗原修复液修复。
抗原修复100℃ 20min ; 自然冷却至室温。
三．pbst洗2遍，pbs洗1遍。每次5min。
四．用30%h2o2和甲醇配制3%的h2o2溶液。每张切片加1滴，室温下孵育10分钟，以阻断内源性过氧化物酶的活性。pbs洗3遍。
五．封闭 3-5%bsa或者1-2�s封闭30min
六．除去封闭液，每张切片加1滴或50μl的第一抗体，室温下孵育60分钟或4℃过夜，建议参见每种抗体的说明书。
抗体稀释液： 1�s溶液（可以加0.01%叠氮钠）
七．洗一抗。pbs洗3遍，每次5min。
八．孵二抗2h(室温)fitc标记山羊抗小鼠二抗1:500，cy3标记的山羊抗兔二抗1：500。
九．洗二抗 pbs洗3遍，每次5min
十．擦干标本边缘水分，加dapi（1ug/ml）5min
十一. 把片子放pbs里，取一张擦干水分，加mouting（sigma m1289）,盖上盖玻片，指甲油封片。